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色譜柱信息
Antibodix離子交換色譜柱特別針對抗體蛋白的分離而設計，該柱具有高分辨率、高柱效、高回收率的特點。填料基質為剛性、球形、高交聯度的無孔聚苯乙烯-二乙烯苯(PS/DVB)顆粒。顆粒大小有1.7μm、3μm、5μm、10μm。PS/DVB樹脂表面鍵合有一層高度親水的納米級厚度的中性聚合物薄層。疏水的PS/DVB樹脂表面******被這種親水材料覆蓋，從而消除了PS/DVB對抗體蛋白的非特異性吸附，******了其具有很高的分離效率和生物樣品回收率。在親水層表面化學鍵合了一層弱陽離子交換基團——羧酸基。運用賽分獨有的化學鍵合技術，離子交換功能基團致密而均勻。
穩定性和性能
由于PS/DVB的表面修飾是******基于化學鍵鍵合，所以Antibodix離子交換色譜柱具有******的穩定性。
技術參數
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Antibodix固定相 |
弱陽離子交換劑 |
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填料 |
以高度交聯的PS/DVB樹脂為內核，表面鍵合一層致密、納米厚度的親水層。親水層的表面再鍵合了一層均勻的離子交換功能基團。 |
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粒徑 |
1.7、3、5、10μm |
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孔結構 |
無孔 |
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pH穩定性 |
2-12 |
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操作溫度極限 |
80 ℃ |
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操作壓力極限 |
10 μm粒徑為4000 psi 5 μm粒徑為6000 psi 3 μm粒徑為8,000psi 1.7 μm粒徑為10,000psi |
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流動相兼容性 |
與水溶液，水與乙腈、丙酮或甲醇的混合物等相容。典型的緩沖液包括磷酸鹽、Tris和醋酸鹽等。 |
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流速 |
內徑為4.6 mm的色譜柱典型操作流速為0.10-1.0 mL/min。 |
安全注意事項
Antibodix離子交換色譜柱通常在高壓下運行。如果管路連接不緊，將會導致有機溶劑和注入樣品的泄漏，從而對操作人員的健康產生影響。一旦發生泄漏，應佩戴適當的手套進行處理。另外當打開色譜柱時還應采取適當的保護措施，以防止微小的高分子顆粒進入呼吸道。
色譜柱安裝與操作
色譜柱在運輸過程中或在沒有使用時，它的兩端總是用堵頭進行密封。當將色譜柱接入色譜儀器系統時，首先移去兩端的堵頭。請注意將流動相流動的方向與柱上標記的方向保持一致。除非出于特殊考慮，例如為了清除堵在色譜柱入口端的臟污等而需要將色譜柱反接以進行沖洗時，建議用戶在接上色譜柱時一定要遵循柱上標記的方向。由于色譜柱的連接是整個色譜操作過程的一部分，如果密封卡套過緊，
或安裝不合適，或者密封卡套與色譜柱端口不匹配，都有可能導致溶液的泄漏。請按照下面步驟將色譜柱與密封卡套相連接，從而將色譜柱接入HPLC系統：
（a）******次使用的管線，請依次將管線接頭和密封卡套裝在外徑1/16”的管線上。密封卡套的寬口端應朝向管線接頭。
（b）將管線緊緊插入色譜柱的接口，向前滑動密封卡套和管線接頭，并使管線接頭的螺紋與色譜柱端口的螺紋相互銜接，然后擰緊管線接頭。如果管線為高分子材料，請轉到步驟（d）；如果是金屬管線，請繼續（c）。
（c）在用力將管線壓入柱端接口之后，用1/4”扳手將已擰緊的螺帽再進一步緊固。
（d）對色譜柱的另一端采用上述方法進行操作。
樣品與流動相
為了避免色譜柱的堵塞，所有樣品和溶劑，包括緩沖溶液在內，都必須在使用前用0.45 mm或0.2 mm的濾膜過濾。建議使用預柱濾片（0.5 mm孔徑）或保護柱來保護色譜柱。Antibodix離子交換色譜柱可以使用水溶液，或者有機溶劑（如甲醇、乙腈）與水的混合物等來作為流動相。典型的流動相中含有磷酸、醋酸或Tris的鈉鹽或鉀鹽。流動相在使用前需要脫氣。一個簡單的脫氣方法是將流動相在由水泵形成的真空下超聲5 min。
Antibodix柱和非離子及兩性離子洗滌劑相容，但是與陽離子洗滌劑不相容。
運輸溶劑 新的Antibodix SCX 和WCX柱中的液相是
******次使用 在儲存和運輸過程中，填料可能會干涸。這時推薦用10-20倍柱體積的運輸溶劑進行沖洗以活化色譜柱。接著可用用戶自己選擇的流動相沖洗色譜柱。流速由0.1mL/min逐漸升至所需的操作條件，直至基線穩定為止。如果柱壓和基線波動較大，這可能是氣泡進入了色譜柱中。這時可用較高流速沖洗色譜柱2-5分鐘，例如4.6′
pH 為了獲得******的分離效果和延長柱的使用壽命，請盡量使用pH在2-12范圍內的流動相。
壓力 盡管粒徑為1.7μm、3μm、5μm、10μm的無孔Antibodix 離子交換柱可分別在高至10,000psi、8,000psi、6,000psi、4,000psi的壓力下使用，但正常的操作壓力應當低于5,000psi（1.7μm應低于8,000 psi）。長時間在高壓下運行可能損壞色譜柱和輸液泵。由于壓力來源于流速，因此******流速將受制于系統所能承受的壓力。一般而言，柱壓會隨著色譜柱使用時間的增加而逐漸增加。壓力突然增加預示色譜柱入口端的篩板發生了堵塞。在這種情況下，建議將色譜柱反接后用適宜的溶劑進行沖洗。
溫度 ******操作溫度為
流速范圍 內徑為
儲藏 長期不用時，請將Antibodix柱保存在20mM磷酸鹽緩沖液（pH 6.0）中。色譜柱需要用儲存緩沖溶液沖洗至少15倍柱體積。然后再用隨色譜柱附上的兩個可拆卸的堵頭塞緊色譜柱的兩端以防止柱床的干涸。
色譜柱的清洗 （1）如果預柱濾片或保護柱在分離之前曾經使用過，需要首先將預柱濾片或保護柱反接用清洗溶液沖洗15-30min。如果經過沖洗效果沒有得到明顯改善，則需要更換預柱濾片或保護柱。清洗溶液為含1.0 M NaCl的
（2）在使用過程中，樣品經常會被吸附在柱入口端的篩板或者填料上。當樣品吸附累積到一定程度時，柱壓將會升高，色譜峰形也會出現展寬。這時***需要清洗色譜柱了。下面是色譜柱清洗的基本步驟。
1．將色譜柱與檢測器斷開；
2．將色譜柱反接后進行沖洗；
3．將流速設置到所推薦的******流速的50%進行沖洗。注意柱壓的變化。如果柱壓超出正常水平許多，則需要降低流速，或選用低粘度的清洗溶液；
4．通常10-15倍柱體積的清洗溶液***足夠了。下面將介紹可供選擇的清洗溶液。低pH的鹽溶液有助于去除堿性蛋白。高pH的鹽溶液有助于去除酸性蛋白。有機溶劑可去除疏水蛋白。對于一般的清洗，建議用含1.0 M NaCl的
色譜柱的保護
除了需要過濾樣品和流動相外，保護色譜柱的******方法是在色譜柱前連接保護柱或預柱濾片。預柱濾片可以去除樣品或流動相中的殘留顆粒，或者從HPLC系統，如泵或進樣器墊圈上脫離下來的顆粒。更為有效的方法是使用保護柱，因為它可以除去樣品、流動相或者來自于HPLC系統中的具有強吸附能力的樣品組分和殘留顆粒。
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